|
[°øÇÐ]½ÇÇ躸°í¼ - Plasmid ºÐ¸® ½ÇÇè & Agarose gelÀ» ÀÌ¿ëÇÑ plasmid Àü±â¿µµ¿ / Plasmid ºÐ¸® ½ÇÇè & Agarose gelÀ» ÀÌ¿ëÇÑ plasmid Àü±â¿µµ¿ 1. Purpose E.coli¸¦ ¹è¾çÇØ Çö󽺹̵带 ºÐ¸®ÇÏ°í, ºÐ¸®ÇÑ Çö󽺹̵带 Á÷Á¢ ¸¸µç Agarose gelÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© Àü±â ¿µµ¿ÇÑ´Ù. 2. Introduction Plasmid DNA ºÐ¸®ÀÇ ¿ø¸® ÁÖ·Î mini-prepÀ̶ó°í ºÎ¸£´Â ÀÌ ¹æ¹ýÀº plasmid DNA¸¦ ¼Ò·® ºÐ¡¦ |
|
|
|
|
|
»ýÈÇÐ »ýÈÇнÇÇè »ý¹°ÇÐ »ý¹°ÇнÇÇè plasmid DNA Extraction ÃßÃâ miniprep Maxiprep / ÀÚ¿¬°úÇкΠ¼ö¼®ÀÇ ½ÇÇè·¹Æ÷Æ® ½Ã¸®Áî¿¡ ¿À½Å °ÍÀ» ȯ¿µÇÕ´Ï´Ù. ¿©·¯°¡Áö ¼Ò½º¸¦ Ãѵ¿¿øÇÏ¿© ÇØ´ç ½ÇÇè¿¡ ´ëÇÑ ÀÌ·Ð ¹× ¹è°æÁö½ÄÀ» Á¶»çÇÏ°í, ½ÇÇè ¹æ¹ý°ú °á°ú, ÅäÀÇ¿¡ ÇØ´çÇÏ´Â ºÎºÐÀº ÃÖ´ëÇÑ Àü¹®Áö½ÄÀ» »ì¸®¸é¼µµ ¿©·¯ºÐÀÌ ÀÌÇØÇϱâ ÁÁµµ·Ï »ó¼¼ÇÏ°í °¡µ¶¼º ÀÖ°Ô ÀÛ¼ºÇß´Ù°í ÀÚºÎÇÕ´Ï´Ù. ¿©·¯¡¦ |
|
|
|
|
|
Plasmid DNA isolation from bacterial cell Miniprep ¿¹ºñ·¹Æ÷Æ® [A+] / ¿¹ºñ·¹Æ÷Æ® ½ÇÇèÁ¦¸ñ : Plasmid DNA isolation from bacterial cell : Miniprep Á¶ : ÇÐ ¹ø : ÀÌ ¸§ : 1. ½ÇÇè ¸ñÀû - DNA isolation ¹æ¹ý ÁßÀÇ ÇϳªÀÎ MiniprepÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ¾ËÄ®¸® Á¶°Ç ÇÏ¿¡¼ ¹Ì»ý¹°(´ëÀå±Õ)ÀÇ ¼¼Æ÷º®°ú ¼¼Æ÷¸·À» ºÎ¼ö°í À¯ÀüÀÚ ÀçÁ¶ÇÕ¿¡ ÇÊ¿äÇÑ Plasmid DNA¸¦ ºÐ¸®ÇÑ´Ù. 2. ¹ÙÅÁ ÀÌ·Ð (¡¦ |
|
|
|
|
|
¡¥´Ù. S1,S2,S3,PW,EB buffer¸¦ ÀÌ¿ëÇØ plasmid DNA¸¦ ºÐ¸®ÇÏ¿´°í, ½ÇÇèÀÇ °á°ú ÃßÃâÇÑ plasmid DNAÀÇ Å©±â¸¦ ÃøÁ¤Çϱâ À§ÇØ Àü±â¿µµ¿À» ÁøÇàÇÏ¿´´Ù. Àü±â¿µµ¿ÀÇ °á°ú¸¦ DNA ladder¿Í ºñ±³Çغ¸´Ï plasmid DNAÀÇ Å©±â´Â 4.0kbp·Î ÃøÁ¤µÇ¾ú´Âµ¥, ½ÇÁ¦ plasmid DNAÀÎ 8.0kbp¿Í Â÷ÀÌ°¡ ³ª°Ô µÈ ¿øÀÎÀ» ºÐ¼®Çغ» °á°ú, ´Ù¾çÇÑ plasmid DNAÀÇ ÇüÅ·ΠÀÎÇÑ °ÍÀ̶ó´Â °ÍÀ» ¾Ë ¼ö ÀÖ¾ú´Ù. ¶ÇÇÑ ÃàÀû¡¦ |
|
|
|
|
|
PCR°ú Gel runningÀ» ÀÌ¿ëÇØ ´ëÀå±ÕÀÇ plasmid °üÂû½ÇÇè / DNA technology Abstract »ý¸íüÀÇ À¯ÀüÁ¤º¸¸¦ ´ã°í ÀÖ´Â DNA´Â ±× Á߿伺À» ÀÎÁ¤¹Þ¾Æ 21¼¼±â À¯Àü°øÇÐ ¿¬±¸¿¡ ÀÖ¾î ¿¬±¸°¡ ¸¹ÀÌ ÁøÇàµÈ ´ë»ó Áß ÇϳªÀÌ´Ù. ±×·¡¼ À̹ø module 3¿¡¼± DNA ¿¬±¸¿¡ ÀÖ¾î ÈçÇÏ°Ô »ç¿ëµÇ´Â DNA cloning, colony PCR, gel running ±â¹ý¿¡ ´ëÇØ ¾Ë¾Æº¸°íÀÚ ÇÑ´Ù. À̸¦ À§ÇØ ´ëÀå±ÕÀ» competent cell·Î¡¦ |
|
|
|
|
|
¡¥DNA ºÐÀÚ·Î ÀûÀº ¼öÀÇ geneÀ» °¡Áö°í ÀÖ´Ù. ÀÌ plasmid´Â À¯ÀüÀÚ ÀçÁ¶ÇÕ ½Ã ÀçÁ¶ÇÕ DNA Á¶ÀÛÀ» À§ÇÑ vector DNA(¼÷ÁÖ¿¡ ÀÌÁ¾ÀÇ DNA¸¦ ¿î¹ÝÇÏ´Â DNA)·Î »ç¿ëµÇ¸ç ¿øÇÏ´Â DNA ´ÜÆíÀ» ³Ö¾î gene cloning µî¿¡ ³Î¸® ÀÌ¿ëµÈ´Ù.1) Plasmid´Â ÁÖ·Î ´ëÀå±Õ ¼¼Æ÷¿¡¼ Áõ½ÄµÇ¸ç vector DNA·Î »ç¿ëµÇ±â À§ÇÏ¿© ´ë·® Áõ½ÄµÈ ´ëÀå±Õ ¼¼Æ÷·ÎºÎÅÍ ºÐ¸®ÇÏ¿© »ç¿ëÇÏ°Ô µÇ´Âµ¥ ´ëÀå±Õ ¼¼Æ÷³»¿¡¼ ¿°»öü¿Í¡¦ |
|
|
|
|
|
[»ý¸í°øÇÐ Plasmid DNA preparation / (1) ½ÇÇè Á¦¸ñ : Plasmid DNA preparation (2) ½ÇÇè ¸ñÀû : Ampicillin¿¡ ´ëÇÏ¿© ÀúÇ×¼ºÀ» Áö´Ñ E. coli (XLI-Blue, Amp-r) ÀÇ plasmid DNA¡¼pBlue½ºÅ©¸³Æ® SK¥±(+)¡½¸¦ isolation ÇÑ´Ù. (3) ½ÇÇè ¿ø¸® : Plasmid DNA¸¦ Á¤Á¦Çϱâ À§Çؼ ¿©·¯ °¡Áö ¹æ¹ýµéÀÌ »ç¿ëµÇ´Âµ¥ °øÅëÀûÀ¸·Î ´ÙÀ½ÀÇ ¼¼ °úÁ¤- ¹Ì»ý¹°ÀÇ ¹è¾ç°ú Çö󽺹̵å ÁõÆø ; ¹Ì»ý¹°¡¦ |
|
|
|
|
|
¡¥ethod¹ýÀÌ ÀÖ´Ù. 2.½ÇÇè¿ø¸® DNA¿Í plasmidÀÇ °íÀ¯ Çüű¸Á¶ ¿ø¸®¿¡ ÀÇÇÑ ºÐ¸® ¹æ¹ýÀ¸·Î½á ¼¼Æ÷³»¿¡ DNA´Â ÀϹÝÀûÀÎ double-helixÀÇ ÇüŸ¦ °¡Áö´Â ¹Ý¸é plasmid´Â supercoiledÇüŸ¦ °¡ÁüÀ¸·Î½á PHº¯È¿¡ µû¶ó¼µµ plasmidÀÇ ÇüÅÂ¿Í ±¸Á¶°¡ Å©°Ô º¯ÇÏÁö ¾Ê¾Æ ¼ø¼öÇÑ plasmid¸¸À» ÃßÃâÇÏ´Â ±¸Á¶Àû ±âº»¿ø¸®¿¡ ÀÇÇÑ ¹æ¹ýÀÌ´Ù. 3.½ÇÇè¹æ¹ý 1. 3ml bacter... / Á¦¸ñ: Mini-Prep (Hybr¡¦ |
|
|
|
|
|
plasmid DNA ÃßÃâ º¸°í¼ / plasmid DNA ÃßÃâ 1. ¼·Ð ºÐÀÚ»ý¹°ÇÐÀÇ µµ¿òÀ¸·Î »ý¹°Ã¼ ³»ÀÇ ¿©·¯ °¡Áö »ýÈÇÐÀû ¹ÝÀÀÀÇ Á¶Àý°ú Áúº´ÀÇ Ä¡·á¿¡ ´ëÇÑ ÀÌÇØ°¡ ºÐÀÚÀû ¼öÁØ¿¡¼ ÀÌ·ç¾îÁö°í ÀÖ´Ù. DNAÀÇ »ý¹°Ã¼ ³»¿¡¼ÀÇ ÀÌ·¯ÇÑ ÀÛ¿ëÀÌ ¹àÇôÁü¿¡ µû¶ó ±× Á߿伺ÀÌ ´õ¿í ºÎ°¢µÇ¾ú°í, ÀÌ DNA¸¦ ¿¬±¸ÇÏ´Â ºÐÀÚ»ý¹°ÇÐÀº Á» ´õ ³ªÀº °á°ú¸¦ À§Çؼ ÇÔ²² ¹ßÀüÇØ ¿Ô´Ù. ¿¹ÄÁ´ë, Àν¶¸°ÀÇ ´ë·®»ý»êÀ»¡¦ |
|
|
|
|
|
[ÀÚ¿¬°úÇÐ] ºÐÀڹ̻ý¹°ÇÐ ½ÇÇè - mini preparation(plasmid DNA¸¦ ¼Ò·® ºÐ¸®ÇÏ´Â ¹æ¹ý) ½ÇÇè / title mini preparation object DNAÀÇ Å©±âÂ÷ÀÌ¿¡ ÀÇÇØ ºÐ¸®ÇÏ´Â ¹æ¹ýÀÎ alkaline lysis method¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© Á¤Á¦µÈ DNAÀÇ ¾çÀ» ºÒ¸°´Ù. introduction À¯ÀüÀÚ ÀçÁ¶ÇÕÀº DNA¸¦ ¸ñÀû¿¡ µû¶ó ÀûÀýÈ÷ ÀÚ¸£°í ºÙ¿©¼ À¯Àü¹°ÁúÀ» ¿øÇÏ´Â ÇüÅ·Π°³Á¶½ÃÅ°´Â °úÁ¤ÀÌ´Ù. °¡Àå ±âº»ÀûÀÎ DNAÁ¶À۱⡦ |
|
|
|
|