(1) ½ÇÇè Á¦¸ñ : Plasmid DNA preparation
(2) ½ÇÇè ¸ñÀû : Ampicillin¿¡ ´ëÇÏ¿© ÀúÇ×¼ºÀ» Áö´Ñ E. coli (XLI-Blue, Amp-r) ÀÇ plasmid
DNA¡¼pBlue½ºÅ©¸³Æ® SK¥±(+)¡½¸¦ isolation ÇÑ´Ù.
(3) ½ÇÇè ¿ø¸® :
Plasmid DNA¸¦ Á¤Á¦Çϱâ À§Çؼ ¿©·¯ °¡Áö ¹æ¹ýµéÀÌ »ç¿ëµÇ´Âµ¥ °øÅëÀûÀ¸·Î ´ÙÀ½ÀÇ ¼¼ °úÁ¤- ¹Ì»ý¹°ÀÇ ¹è¾ç°ú Çö󽺹̵å ÁõÆø ; ¹Ì»ý¹° ¼ö°Å¿Í cell lysis ; plasmid DNA Á¤Á¦-À» °ÅÄ£´Ù.
DNA¸¦ ºÐ¸®Çϱâ À§Çؼ´Â ÀÏ´Ü DNA°¡ ¼¼Æ÷ ¹ÛÀ¸·Î À¯ÃâµÇµµ·Ï ¼¼Æ÷º® ¹× ¼¼Æ÷¸·À» ºÐÇØ ½ÃÄÑ¾ß ÇÏ°í, À̶§ DNA °¡¼öºÐÇØ È¿¼ÒµéÀÇ È°¼ºÀ» ¾ïÁ¦ÇÏ´Â Á¶°Ç¿¡¼ DNA¸¦ ºÐ¸®ÇØ¾ß ÇÏ¸ç ´Ü¹éÁúÀ̳ª RNA°¡ °°ÀÌ È¸¼öµÇÁö ¾Êµµ·Ï ÇØ¾ß ÇÑ´Ù.
¼¼Æ÷º®À» °¡Áö´Â ¹ÚÅ׸®¾ÆÀÇ °æ¿ì¿¡´Â ¸ÕÀú lysozymeÀ» ó¸®ÇÏ¿© ¼¼Æ÷º®À» ºÐÇØ ½ÃÅ°¸ç ¼¼Æ÷¸·Àº detergentÀÎ SDS¸¦ ó¸®ÇÔÀ¸·Î½á ºÐÇØ ½ÃŲ´Ù. SDS´Â ¼¼Æ÷¸·À» ºÐÇØ ½Ãų »Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó ´Ü¹éÁúÀ» º¯¼º½Ãų ¼ö ÀÖ¾î ÇÙ»ê °¡¼öºÐÇØÈ¿¼ÒµéÀÇ ÀÛ¿ëÀ» ¾ïÁ¦ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ´Ü¹éÁúµéÀº phenol°ú chloroformÀ» ó¸®ÇÔÀ¸·Î½á Á¦°ÅÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. DNA´Â alcohol¿¡ ÀÇÇÑ Ä§ÀüÀ¸·Î ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Ù. RNA´Â RNase¿¡ ÀÇÇØ¡¦(»ý·«)
(4) ½ÇÇè Àç·á :
¨ç Strain : Plasmid DNA¡¼pBlue½ºÅ©¸³Æ® SK¥±(+)¡½
¨è LB (containing Ampicillin) broth
¨é Solution I (100 mL)
¨é Solution ¥± (100 mL)
¨ê Solution ¥² (100 mL)
¨ë TE buffer (100 mL)
? 1 mM EDTA (pH 8.0) (MW¡ë372.2, 0.04 g)
¨ì Ethanol, 7
|