Plasmid DNA Purification
1. ¼·Ð
Plasmid´Â bacteria ¼¼Æ÷ÀÇ ¿°»öü¿Í´Â º°µµ·Î Á¸ÀçÇÏ¸é¼ self-replicationÀ» ÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ¿øÇü DNA ºÐÀÚ·Î ÀûÀº ¼öÀÇ geneÀ» °¡Áö°í ÀÖ´Ù. ÀÌ plasmid´Â À¯ÀüÀÚ ÀçÁ¶ÇÕ ½Ã ÀçÁ¶ÇÕ DNA Á¶ÀÛÀ» À§ÇÑ vector DNA(¼÷ÁÖ¿¡ ÀÌÁ¾ÀÇ DNA¸¦ ¿î¹ÝÇÏ´Â DNA)·Î »ç¿ëµÇ¸ç ¿øÇÏ´Â DNA ´ÜÆíÀ» ³Ö¾î gene cloning µî¿¡ ³Î¸® ÀÌ¿ëµÈ´Ù.1) Plasmid´Â ÁÖ·Î ´ëÀå±Õ ¼¼Æ÷¿¡¼ Áõ½ÄµÇ¸ç vector DNA·Î »ç¿ëµÇ±â À§ÇÏ¿© ´ë·® Áõ½ÄµÈ ´ëÀå±Õ ¼¼Æ÷·ÎºÎÅÍ ºÐ¸®ÇÏ¿© »ç¿ëÇÏ°Ô µÇ´Âµ¥ ´ëÀå±Õ ¼¼Æ÷³»¿¡¼ ¿°»öü¿Í´Â º°µµ·Î Á¸ÀçÇϱ⠶§¹®¿¡, plasmid DNA ºÐ¸®´Â ¿°»öü DNA°¡ Æ÷ÇÔµÇÁö ¾Ê°Ô ºÐ¸®ÇÏ´Â ¹æ¹ýÀÌ »ç¿ëµÇ°Ô µÈ´Ù. ÀÌ·¯ÇÑ ºÐ¸® ¹æ¹ý Áß ³Î¸® »ç¿ëµÇ´Â ¹æ¹ý Áß Çϳª°¡ Alkaline Lysis¹ýÀÌ´Ù. Alkaline Lysis¹ýÀ̶õ ³ôÀº pHÀÇ ¾ËÄ«¸®¼º anionic detergent¿ë¾×À» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ´ëÀå±Õ ¼¼Æ÷¸¦ lysis ½ÃÅ°°í plasmid¸¦ ¿°»öü DNA¿Í ±¸ºÐÇÏ¿© ºÐ¸®ÇÏ´Â ½ÇÇè¹ýÀ¸·Î ±× ¿ø¸®´Â ´ÙÀ½°ú °°´Ù. Alkaline Lysis¹ý¿¡¼´Â ³ôÀº pHÀÇ alkaline ¿ë¾× »óÅ¿¡¼ ¿°»öü¿Í plasmidÀÇ Å©±â ¹× topology¿¡ ÀÇÇÏ¿© ¿°»öü¿Í È¥ÇÕµÈ »óÅ·κÎÅÍ plasmid¸¸ ºÐ¸®ÇÏ°Ô µÈ´Ù.¡¦(»ý·«)
2. °á°ú
3. ³íÀÇ
1) Resuspension buffer
|