Plasmid ºÐ¸® ½ÇÇè & Agarose gelÀ» ÀÌ¿ëÇÑ plasmid Àü±â¿µµ¿
1. Purpose
E.coli¸¦ ¹è¾çÇØ Çö󽺹̵带 ºÐ¸®ÇÏ°í, ºÐ¸®ÇÑ Çö󽺹̵带 Á÷Á¢ ¸¸µç Agarose gelÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿©
Àü±â ¿µµ¿ÇÑ´Ù.
2. Introduction
Plasmid DNA ºÐ¸®ÀÇ ¿ø¸®
ÁÖ·Î mini-prepÀ̶ó°í ºÎ¸£´Â ÀÌ ¹æ¹ýÀº plasmid DNA¸¦ ¼Ò·® ºÐ¸®ÇÏ´Â ¹æ¹ýÀÌ´Ù. °¡Àå º¸ÆíÀûÀ¸
·Î »ç¿ëµÇ´Â ¹æ¹ýÀÎ Alkali lysis methodÀÌ´Ù. ±âº»ÀûÀÎ ¿ø¸®´Â ±×¸²¿¡¼ º¸µíÀÌ ¼¼±ÕÀÇ cell wall°ú
cell membraneÀ» ºÎ¼ö°í DNA ¸¸À» ºÐ¸®ÇÏ´Â °ÍÀÌ´Ù. ÀÌ ¶§ Áß¿äÇÑ °ÍÀº ¼¼±ÕÀÌ ¿ø·¡ °¡Áö°í ÀÖ´Â
chromosomal DNA¿Í plasmid DNA¸¦ ±¸ºÐÇÏ¿© ºÐ¸®ÇÏ´Â °ÍÀÌ´Ù. ÀÌ µÑÀº ¸ðµÎ DNAÀ̹ǷΠ¼ºÁúÀÌ
ºñ½ÁÇϱ⠶§¹®¿¡ ±¸ºÐÇÏ¿© ºÐ¸®ÇϱⰡ ½±Áö ¾Ê´Ù. ´ÙÇàÈ÷ chromosomal DNA´Â ºÐ¸® °úÁ¤¿¡¼
linear ÇüÅ°¡ µÇ°í Å©±â°¡ »ó´çÈ÷ Å©±â ¶§¹®¿¡ ÀÌ·± ¼ºÁúÀÇ Â÷À̸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¸é ºÐ¸®ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. Alkali
lysis method ÀÇ ÇÙ½É ¿ø¸®´Â ´ÙÀ½°ú °°´Ù.
1. ¼¼Æ÷º®À» ±ü´Ù. ÀÌ ¶§ ¼¼Æ÷¸·Àº À¯ÁöµÇµµ·Ï ÇÑ´Ù. ¼¼Æ÷º®À» ±ºµ¥±ºµ¥ ¹«³Ê¶ß¸®´Â ¹°ÁúÀº EDTAÀ̸ç, À̶§¡¦(»ý·«)
3. pH¸¦ ±Þ°ÝÈ÷ 7.0±îÁö º¹±¸½ÃÅ°¸é Å©±â°¡ ÀÛ°í supercoiled formÀ» À¯ÁöÇÏ°í ÀÖ´ø plasmid´Â ºñ±³Àû renaturationÀÌ Àß µÇÁö¸¸, chromosomal DNA´Â ¹Ìó renatureµÇÁö ¸øÇÏ°í ¾û±â°Ô µÈ´Ù. ÀÌ·¸°Ô ¾û±ä chromosomal DNA¸¦ ¿ø½ÉºÐ¸®·Î Á¦°ÅÇÑ´Ù. ±×·¯¸é »óÃþ¾×¿¡ plasmid DNA°¡ ÀÖ°Ô µÈ´Ù.
|