SDS PAGE와 Western blotting 실험 report

1. 실험목적

SDS PAGE와 Western blotting 실험의 목적은 생물학적 샘플에서 단백질의 분리, 정량 및 확인을 수행하는 것이다. SDS PAGE는 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis의 약자로, 단백질의 분자량에 따라 분리하는 전기영동 기법이다. 이 방법은 단백질이 그들의 전하에 관계없이 크기 기준으로 이동할 수 있도록 해주며, SDS라는 계면활성제를 사용하여 단백질을 변성시켜 각 단백질을 동일한 전하 밀도로 만들어 준다. 그런 다음, polyacrylamide gel에서 전기를 흘려 보내어 단백질을 크기별로 분리하게 된다. 이 과정을 통해 혼합물에서 특정 단백질을 식별하고, 단백질의 크기 및 순도를 분석할 수 있다. Western blotting은 SDS PAGE에서 분리된 단백질을 조사하기 위한 후속 단계로, 특정 단백질을 검출하기 위해 수행된다. 이 기법은 선별적으로 단백질을 인식할 수 있는 항체를 사용하는데, 첫 번째 단계에서는 전기영동을 통해 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스 또는 PVDF 막으로 전이시킨다. 이후, 막은 특정 단백질에 결합하는 1차 항체로 처리되고, 그 뒤에는 알칼리성 포스파타제나 효소 표지된 2차 항체로 처리하여 시각화…(생략)