서강대학교 현대생물학실험2 4차 풀레포트 Site-directed mutagenesis , DNA sequencing

1. Abstract

이 실험은 사이트 지향 돌연변이 유도(Site-directed mutagenesis)와 이를 통한 DNA 서열 분석을 통해 특정 유전자의 기능을 연구하는 것을 목표로 한다. 사이트 지향 돌연변이는 특정 DNA 서열에서 정확히 목표로 하는 위치에 인위적인 변이를 도입하는 기술로, 유전자 기능 분석, 단백질 구조-기능 분해 및 생물학적 시스템의 메커니즘 연구에 널리 활용된다. 본 연구에서는 특정 유전자의 단일 아미노산 치환을 통해 해당 유전자가 발현하는 단백질의 기능적 변화를 관찰하고, 이러한 변화를 DNA 서열 데이터를 통해 정량적으로 분석한다. 실험 과정은 크게 두 단계로 나누어진다. 첫째, 특정 유전자의 돌연변이를 유도하기 위해 상보적인 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 설계하고, 이를 이용해 PCR(중합효소 연쇄 반응)을 수행한다. 이 과정에서 타겟 서열을 확보하고, 복제 및 증폭하여 돌연변이를 포함하는 새로운 DNA 조각을 생성한다. 이때 PCR의 조건을 최적화하여 최대한 높은 확률로 목표하는 변이가 생성될 수 있도록 한다. 둘째, 돌연변이가 포함된 DNA를 클로닝 벡터에 삽입하고, 이를 숙주세포에 도입하여 발현시킨다. 이후, 생성된 단백질의…(생략)