실험 예비레포트(western blot의 detection의 원리)

1. Western Blot에서 Detection 원리

Western Blot에서 Detection 원리는 단백질의 존재와 발현량을 확인하기 위한 핵심적인 과정이다. 이 기술은 특정 단백질을 검출하기 위해 전기영동, 전이 및 항체 반응의 세 가지 주요 단계를 포함한다. 먼저, 시료에서 단백질을 추출한 후 SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)를 이용하여 단백질을 크기에 따라 분리한다. 이 단계에서 SDS는 단백질을 변성시키고 음전하를 부여하여 단백질들이 분자량에 따라 gel에서 이동하도록 한다. 분리된 단백질은 이후 니트로셀룰로오스 또는 PVDF(Polyvinylidene Fluoride) membrane으로 전이된다. 이 전이 과정은 전기적인 힘을 이용하여 gel에 있는 단백질들이 membrane으로 이동하게 하여 고정시키는 단계이다. 단백질이 membrane에 고정된 후, 비특이적 결합을 차단하기 위해 블로킹 단계에서 비특이적 단백질 차단 용액을 처리한다. 이 단계는 항체가 비특정적인 위치에 결합하는 것을 방지하여, 이후의 항체 탐지 과정에서 신뢰성을 높인다. 이제 Detection 단계로 이동하는데, 이 단계에서 특정 단백질을 인식하는 1차 항체를 membrane에 처리한다. …(생략)