[분자생물학실험]Competent cell을 통한 형질전환효율 측정 그리고 PCR product의 전기영동

1. 실험 이론 및 원리

형질전환은 외부의 유전 물질을 세포에 도입하여 각각의 유전적 특성을 변화시키는 과정이다. 이 과정에서 competent cell은 외부 DNA를 효과적으로 흡수할 수 있는 상태로 처리된 박테리아 세포를 의미한다. Competent cell을 만드는 방법에는 화학적 처리 방법과 물리적 방법이 있으며, 흔히 사용하는 화학적 방법에는 CaCl2 또는 MgCl2와 같은 이온을 이용한 활성화 처리와, 물리적 방법으로는 전기천공법(Electroporation)이 있다. Competent cell이 DNA를 흡수할 수 있는 가장 중요한 이유는 세포막의 투과성을 증가시켜 외부 DNA가 세포 내로 쉽게 들어올 수 있도록 하기 때문이다. 형질전환 효율은 Competent cell이 외부의 DNA를 성공적으로 흡수하여 형질전환되는 세포의 비율로 정의된다. 이를 평가하기 위해서는 먼저 시료에서 형질전환에 사용할 DNA를 준비한 후, competent cell과 혼합하여 인큐베이션한다. 이후, 염색하고 선택 마커가 있는 배지를 사용하여 생존한 세포의 수를 계산한다. 이 과정에서 형질전환 효율은 형질전환으로 인해 생존한 박테리아 수를 competent cell의 수로 나누어 구하게 된다. 즉, 형질전환 효율 = (형질전…(생략)