서강대학교 현대생물학실험2 4차 풀레포트 Site-directed mutagenesis , DNA sequencing

1. Abstract

이번 연구에서는 사이트 지향 돌연변이 유도(site-directed mutagenesis) 기법을 활용하여 특정 유전자의 변형을 유도하고, 그 결과로 생성된 돌연변이의 효과를 이해하기 위한 실험을 진행하였다. 최근 생명과학 분야에서 유전자의 기능 규명 및 단백질 상호작용 연구에 있어 사이트 지향 돌연변이 유도는 중요한 기법으로 자리잡고 있으며, 이를 통해 특정 아미노산의 변형이 단백질의 구조와 기능에 미치는 영향을 평가하는 데 필수적이다. 본 연구의 주요 목적은 특정 유전자의 특정 부위에서 의도적으로 돌연변이를 유도하고, 이들 돌연변이가 단백질의 기능적 특성에 미치는 영향을 규명하는 것이다. 실험 과정에서 우선적으로 선택한 유전자 배열의 DNA 시퀀스를 분석하고, 특정한 아미노산 잔기를 변화시키기 위한 프라이머를 설계하였다. 이 프라이머를 이용해 PCR을 진행하여 원하는 돌연변이를 포함한 DNA 조각을 증폭하였으며, 이어서 이 조각을 클로닝하여 이를 발현하는 시스템으로 전이하였다. 이 과정에서 필수적인 DNA 시퀀스의 확인을 위해 Sanger 시퀀싱을 수행하였으며, 이로써 돌연변이가 효과적으로 유도되었음을 검증하였다. 한편, 생성…(생략)