[서강대학교 현대생물학실험2] (4차 풀레포트) Site-directed mutagenesis, DNA sequencing

1. Abstract

본 실험에서는 사이트 지향 돌연변이 유발(site-directed mutagenesis) 방법을 통해 특정한 유전자의 서열을 변형시키고, 그 결과로 나타나는 드러나는 변화를 분석하기 위해 DNA 염기서열을 해독하는 과정을 다룬다. 사이트 지향 돌연변이는 특정 아미노산 잔기를 교체하여 단백질의 기능이나 구조적 특성을 연구하는 데 유용한 기법이다. 본 연구의 목표는 특정 유전자의 특정 부위에 인위적으로 돌연변이를 유도하고, 이를 통해 단백질의 생물학적 활성이 어떻게 변화하는지를 파악하는 것이다. 실험은 단계적으로 진행되며, 첫 번째 단계는 원하는 영역의 DNA를 증폭하기 위해 두 개의 프라이머를 설계하는 것이었다. 이 프라이머는 특정 부위에 돌연변이를 유도할 수 있도록 디자인되었으며, PCR(중합효소 연쇄반응)을 통해 타겟 DNA를 증폭하였다. 이후, 이 PCR 산물을 이용하여 비특이적인 DNA를 제거하고, 돌연변이가 포함된 DNA를 정제하였다. 정제된 DNA는 Sanger 염기서열 분석에 사용되었으며, 이를 통해 생성된 돌연변이가 성공적으로 삽입되었는지를 확인할 수 있었다. 분석 결과, 원래의 유전자 서열에서 의도된 돌연변이가 성공적으로 도입된 …(생략)