1. ½ÇÇè ¸ñÀû
2. ½ÇÇè ¿ø¸®
3. ½ÇÇè ¹æ¹ý
`°á°úº¸°í¼`
1. ½ÇÇè °á°ú
2. °íÂû
`¿¹ºñº¸°í¼`
»ýÈÇнÇÇèA+¿¡¼ ¼öÇàÇÑ Ligation °á°ú È®ÀÎÀ» À§ÇÑ Á¦ÇÑÈ¿¼Ò ¹ÝÀÀ ¹× ´Ü¹éÁú °ú¹ßÇö¿¡ °üÇÑ ¿¹ºñº¸°í¼¸¦ ÀÛ¼ºÇÏ°Ú´Ù. À̹ø ½ÇÇèÀÇ ¸ñÀûÀº DNA Á¶°¢À» ¿¬°áÇÏ´Â Ligation °úÁ¤À» ÅëÇØ À¯ÀüÀÚ Å¬·Î´×ÀÇ ±âÃʸ¦ ÀÌÇØÇÏ°í, ÀÌ¾î¼ À̸¦ Á¦ÇÑÈ¿¼Ò·Î ºÐ¼®ÇÏ´Â ¹æ¹ý°ú ´Ü¹éÁú °ú¹ßÇö °úÁ¤À» ÇнÀÇÏ´Â °ÍÀÌ´Ù. Ligation °úÁ¤Àº DNAÀÇ Æ¯Á¤ Á¶°¢À» ¿¬°áÇÏ¿© »õ·Î¿î ÀçÁ¶ÇÕ DNA¸¦ ¸¸µå´Â ÇÙ½ÉÀûÀÎ ´Ü°èÀÌ´Ù. À̸¦ À§ÇØ »ç¿ëÇÒ Çö󽺹̵å DNA¿Í »ðÀÔ Á¶°¢ÀΠŸ°Ù DNA°¡ ÇÊ¿äÇÏ´Ù. ¸ÕÀú, ÀÌµé °¢°¢ÀÇ DNA Á¶°¢Àº Á¦ÇÑÈ¿¼Ò¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ƯÁ¤ÇÑ ºÎÀ§¿¡¼ Àý´ÜµÈ´Ù. Á¦ÇÑÈ¿¼Ò´Â ƯÁ¤ÇÑ ¿°±â¼¿À» ÀνÄÇÏ¿© ±× ºÎÀ§¸¦ ÀÚ¸£´Â È¿¼Ò·Î, ½ÇÇè¿¡ ÀûÇÕÇÑ Á¦ÇÑÈ¿¼Ò¸¦ ¼±ÅÃÇÏ´Â °ÍÀÌ Áß¿äÇÏ´Ù. Çö󽺹̵å DNA¿Í Ÿ°Ù DNAÀÇ ¾ç³¡¿¡´Â »óÈ£º¸¿ÏÀûÀÎ Sticky end°¡ Çü¼ºµÇ¾î Ligation ¹ÝÀÀÀ» ÅëÇØ ¼·Î °áÇÕÇÒ ¼ö ÀÖ°Ô µÈ´Ù. Ligation ¹ÝÀÀ¿¡´Â T4 DNA ligase¶ó´Â È¿¼Ò°¡ »ç¿ëµÈ´Ù. ÀÌ È¿¼Ò´Â µÎ °³ÀÇ DNA Á¶°¢ÀÇ ¸»´ÜÀ» ¿¬°áÇÏ¿© Àλê´ÙÀÌ¿¡½ºÅÍ °áÇÕÀ» Çü¼ºÇÏ´Â ¿ªÇÒÀ» ÇÑ´Ù. ÀÌ °úÁ¤¿¡¼ ATP°¡ ÇÊ¿äÇѵ¥, ATP´Â DNA ligaseÀÇ È°¼º¿¡ ÇʼöÀûÀÎ ÆÄÆ®³Ê Ç׸ñÀÌ´Ù. DNA Á¶°¢ÀÌ ¿¬°áµÈ ÈÄ, À̸¦ ÇüÁúÀüȯÀ» ÅëÇØ ¼÷ÁÖ ¼¼Æ÷¿¡ µµÀÔÇÏ¿© ´Ü¹éÁúÀ» °ú¹ßÇöÇÏ´Â ´Ü°è·Î ³ª¾Æ°£´Ù. ÀϹÝÀûÀ¸·Î ´ëÀå±Õ(E. coli)¿Í °°Àº ¹Ì»ý¹°ÀÌ ´Ü¹éÁú »ý»êÀÇ ¼÷ÁÖ·Î ¸¹ÀÌ »ç¿ëµÈ´Ù. ¼÷ÁÖ ¼¼Æ÷¿¡ º¯ÇüµÈ Çö󽺹̵带 µµÀÔÇϸé, E. coli ¼¼Æ÷ ³»¿¡¼ ÇØ´ç Çö󽺹̵忡 ÀÇÇØ ¹ßÇöµÇ´Â ´Ü¹éÁúÀÌ »ý¼ºµÈ´Ù. À̶§, ¼±Åà ¸¶Ä¿·Î ÀÚÁÖ »ç¿ëµÇ´Â Ç×»ýÁ¦ ³»¼º À¯ÀüÀÚ¸¦ Æ÷ÇÔ½ÃÅ°¸é, ¼¼Æ÷°¡ Çö󽺹̵带 Á¦´ë·Î ¹ÞÀº °æ¿ì¿¡¸¸ »ýÁ¸ÇÒ ¼ö ÀÖµµ·Ï ÇÏ¿© ¼º°øÀûÀΠŬ·Î´×À» È®ÀÎÇÏ´Â ¼ö´ÜÀÌ µÈ´Ù. µû¶ó¼ ¼±ÅÃÀûÀΠȯ°æ¿¡¼ ¼¼Æ÷¸¦ ¹è¾çÇϸé, ¿øÇÏ´Â ´Ü¹éÁúÀ» °ú¹ßÇöÇÏ´Â ¼¼Æ÷¸¦
...
|