½ÇÇè ÀϽÃ:
1. Á¦¸ñ : ´Ü¹éÁú Á¤·® ºÐ¼® BCA¹ý & SDS-PAGE ºÐ¼® & Western Blot
2. ½ÇÇè ¸ñÀû
: BCA Method¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© ¿ìÀ¯ ÁßÀÇ ´Ü¹éÁú ÇÔ·®À» ºÐ¼®ÇÏ°í SDS-PAGE¿Í Coomassie Blue ¿°»öÀ» ÅëÇØ ´Ü¹éÁúÀÇ Àü±â¿µµ¿ °á°ú¸¦ °üÂûÇÑ °ÍÀ» ¹ÙÅÁÀ¸·Î Western BlotÀ» ½ÃÇàÇÏ¿© membrane¿¡ transfer½ÃÄÑ, Ç׿ø-Ç×ü ¹ÝÀÀÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ƯÁ¤ÇÑ ´Ü¹éÁúÀÇ Á¤·® ºÐ¼®°ú °ËÃâÇÏ´Â ¹æ¹ýÀ» ½ÇÇèÀ» ÅëÇØ ¼÷ÁöÇÑ´Ù.
3. ÀÌ·Ð
¥°. ´Ü¹éÁú Á¤·®¹ý
1) BCA(Bicinchoninic Acid) ¹ý
- ´Ü¹éÁúÀÌ ±¸¸® ÀÌ¿Â(Cu2+, Cu1+)À» ȯ¿ø (Reduction) ½Ãų ¼ö ÀÖ´Â ¼ºÁúÀ» ÀÌ¿ë
Fig 1. BCA ¿ø¸® ¸ð½Äµµ
- ´Ü¹éÁú¿¡ ÀÇÇØ È¯¿øµÈ ±¸¸® ÀÌ¿ÂÀº BCA¿ë¾×°ú ¹ÝÀÀÀ» Çؼ º¸¶ó ºûÀÇ ÈÇÕ¹°À» »ý¼º
- ÀÌ ÈÇÕ¹°Àº ºûÀÇ Æ¯Á¤ ¿µ¿ª(562nm)¿¡¼ ±¸¸® ÀÌ¿ÂÀÌ ´ã±ä ¿ë¾×°ú BCA¿ë¾× °¢°¢º¸´Ù ºûÀÇ Èí¼öÀ²ÀÌ ³ô±â¿¡, spectrophotometer¸¦ »ç¿ëÇؼ ÃøÁ¤Çϸé Èí¼öÀ² Â÷À̸¦ ÃøÁ¤ÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù.
- ´Ü¹éÁúÀÇ ¾çÀÌ ¸¹À¸¸é º¸´Ù ¸¹Àº º¸¶óºû ÈÇÕ¹°ÀÌ »ý¼º ¡æ ±× ÈÇÕ¹°Àº ºûÀ» ´õ ¸¹ÀÌ Èí¼ö. Áï Èí¼öÀ²ÀÌ Áõ°¡ ¡æ ±×°Í¿¡ ºñ·ÊÇؼ Sample¿¡¡¦(»ý·«)
2) Lowly assay(Folin-Ciocalteau)
3) Bradford assay
|