1st day
(1)Seed Culture : 3ml LA media(LB + ampicillin)¿¡ single colony¸¦ Á¢Á¾ÇÑ ÈÄ 37¡É ¿¡¼ overnight cultureÇÑ´Ù.
2nd day
(1) 200ml LA media¿¡ seed culture 2mlÀ» inoculationÇÏ¿©, 37¡É ¿¡¼ O.D.600nm ~0.5°¡ µÉ ¶§±îÁö ÁøÅÁ¹è¾ç ÇÑ´Ù.
(2) Induction : IPTG¸¦ final concentration 0.5mMÀÌ µÇµµ·Ï ÷°¡ÇÑ µÚ, 14~16½Ã°£ µ¿¾È 37¡É ¿¡¼ ÁøÅÁ¹è¾ç ÇÑ´Ù. (1M IPTG 100ul ÷°¡)
3rd day
(1) Harvest : culture¸¦ °¢°¢ 500ml centrifugation tube·Î ¿Å±ä µÚ high speed centrifuge·Î 6,000 rpm/10 min/4¡É ¿¡¼ centrifugation ÇÑ ÈÄ media¸¦ Á¦°ÅÇÑ´Ù.
(2)20ml Buffer A·Î pelletÀ» resuspensionÇÑ ÈÄ À§¿Í µ¿ÀÏÇÑ Á¶°Ç¿¡¼ centrifugation ÇÏ°í, supernatant Á¦°ÅÇÑ´Ù.
-ÀÌ°úÁ¤±îÁö´Â, Á¶±³´Ô²²¼, ¹Ì¸® ½ÇÇè ÇØ ³õÀ½.
(3) Cell lysis : pellet¿¡ 10mlÀÇ Buffer A¿Í final conc. 4mg/ml·Î lysozymeÀ» ³Ö°í resuspendÇÑ ÈÄ, R/T¿¡¼ 15ºÐ µ¿¾È incubationÇÑ´Ù. (Rotator ÀÌ¿ë)
(4) Buffer B¸¦ 10ml ÷°¡ÇÑ µÚ 75 ¡É ¿¡¼ 10ºÐ °£°ÝÀ¸·Î sampleÀ» Àß ¼¯¾îÁÖ¸ç 1½Ã°£ µ¿¾È incubationÇÏ°í, high speed centrifuge·Î 12,000 rpm/20 min/4 ¡É¡¦(»ý·«)
|