Plasmid isolation

미리 준비한 박테리아를 증식시킨다. 이 박테리아에는 재조합 plasmid가 이미 들어 있는 상태이다. 박테리아를 배양하여 충분한 양의 plasmid가 확보되면 prep. 한다. 추출한 plasmid는 관찰하기 용이하도록 제한효소 처리를 할 수 있다. 이 plasmid를 전기영동으로 관찰한다.

3. process

1) Bacteria Culture
실험에 사용한 박테리아는 가장 많이 사용하는 E.coli 이다. 최적 상태에서 doubling time은 20 분 정도이고 배양한지 11시간 정도가 지나면 stationary phase에 이르러 그 수가 약 109개 정도가 된다. Tube에 LB 미디어를 2000㎕를 넣고 pipet으로 콜로니 하나 (E.coli , plasmid는 PCH 110) 를 조심스럽게 떠내어 tube에 넣고 확실히 들어가도록 잘 흔든다. 37 C 정도로 맞춰진 shaking-인큐베이터에서 11～12 시간 배양시킨다.

2) Plasmid Prep.
배양한 박테리아에서 plasmid DNA를 추출하는 과정이다. 기본적으로 원심분리가 가장 많이 이용된다.
① 박테리아가 배양된 미디어에서 pipet으로 1400㎕를 추출하여 1.5㎖ tube에 넣는다.
② 원심분리 (14000 rpm, 2 min) 하여 E.coli cell만 바닥에 가라앉힌다.
③ 미디어는 따라 버리고 남은 …(생략)