1. 15 ml cornical tube¿¡ ÁغñµÈ phage plating ¼¼Æ÷¸¦ 200 ml ¾¿ ºÐÁÖÇÑ´Ù.
2. Infection ½ÃÅ°°íÀÚ ÇÏ´Â phageÀÇ ¼ýÀÚ¸¦ ÇÔÀ¯ÇÏ´Â Èñ¼®µÈ library ¿ë¾×À» ÁغñÇÑ´Ù.
u 90 mm plateÀÏ °æ¿ì 10,000 pfu, 150 mm plateÀÇ °æ¿ì 30,000 pfuÀÇ phage¸¦ infection½ÃÄÑ agar plate¿¡¼ ¹è¾çÇÑ ÈÄ screenÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. ÀÌ ÀÌ»óÀÇ ¼ýÀÚ·Î infection½Ãų °æ¿ì screeningÀÌ ¾î·Á¿öÁø´Ù. ¶ÇÇÑ ¼¼Æ÷ÀÇ ¾çµµ 150 mm plateÀÇ °æ¿ì 500 ml¸¦ »ç¿ëÇÏ¿©¾ß ÇÑ´Ù. Infection ½ÃÅ°´Â phage ¿ë¾×Àº 1x lambda dilution buffer¿¡ Èñ¼®µÇ¾î¾ß ÇÏ¸ç ¿ë·®Àº phage plating ¼¼Æ÷·®ÀÇ 1/2ÀÌ µÇµµ·Ï ÇÑ´Ù.
3. Phage plating ¼¼Æ÷°¡ ´ã°Ü ÀÖ´Â cornical tube¿¡ 100 mlÀÇ phage ¿ë¾×À» °¡ÇÏ°í Àß ¼¯Àº ÈÄ 37¡ÆC¿¡¼ 15ºÐ°£ ¹æÄ¡ÇÑ´Ù.
4. 48¡ÆC·Î ¿Âµµ¸¦ ¸ÂÃá 10 mM MgSO4°¡ ÇÔÀ¯µÈ LB top agarose¸¦ 4 ml °¡ÇÏ°í °ÅÇ°ÀÌ »ý±âÁö ¾Êµµ·Ï ÁÖÀÇÇϸç Àß ¼¯Àº ÈÄ Áï½Ã 90 mm LB plate¿¡ ºÎ¾î °í·ç ÆÛÁö°Ô ÇÑ ÈÄ ¼öÆòÆÇ À§¿¡¼ ¾à 10ºÐ°£ ¹æÄ¡ÇÑ´Ù.
5. Plate¸¦ 37¡ÆC ¹è¾ç±â¿¡¼ 6½Ã°£ ³»Áö 10½Ã°£ µ¿¾È ¹è¾çÇÑ´Ù.
u Phage°¡ infectionµÇ¾î Çü¼ºµÈ plaque´Â¡¦(»ý·«)
6. Hybridization¿¡ »ç¿ëÇÒ nylon membraneÀ» µ¤±â À§ÇÏ¿© 4¡ÆC¿¡¼ ÃÖ¼ÒÇÑ 30ºÐÀÌ»ó ¹æÄ¡Çϵµ·Ï ÇÑ´Ù.
|