LigationÀº ¹®ÀÚ ±×´ë·Î DNA³ª RNAÀÇ ³¡À» À̾îÁÖ´Â °úÁ¤À» °¡¸®Å°´Â ¿ë¾îÀÌ´Ù. ÀÌ ¹ÝÀÀ¿¡ ÀÌ¿ëµÇ´Â È¿¼Ò¸¦ ligase¶ó Çϸç DNA¸¦ ±âÁú·Î »ç¿ëÇÏ´Â ligase¸¦ DNA ligase, RNA¸¦ ±âÁú·Î »ç¿ëÇÏ´Â ligase¸¦ RNA ligase¶ó ÇÑ´Ù. RNA ligase´Â single strandÀÇ DNA ¶Ç´Â RNA ³¢¸® ¿¬°áÇØ ÁÖ´Â È¿¼Ò·Î 5`-RACE¿Í °°Àº Ư¼öÇÑ ¸ñÀûÀÇ ½ÇÇè¿¡¼ »ç¿ëµÉ ¼ö ÀÖÀ¸³ª ÀÌ Àå¿¡¼´Â ¼³¸íÇÏÁö ¾Ê¾Ò´Ù.
À¯ÀüÀÚ ÀçÁ¶ÇÕ °úÁ¤¿¡ »ç¿ëµÇ´Â ligase´Â ÁÖ·Î DNA ligaseÀ̸ç ÀÌ È¿¼Ò´Â ¿øÇÙ¼¼Æ÷, ÁøÇÙ¼¼Æ÷, ¹ÙÀÌ·¯½º µî¿¡¼ À¯·¡ÇÑ °ÍÀÌ Àִµ¥, ÇöÀç ¸¹ÀÌ »ç¿ëµÇ´Â ligase´Â T4 DNA ligase¿Í E. coli DNA ligaseÀÌ´Ù. T4 DNA ligase´Â cofactor·Î ATP¸¦ ÇÊ¿ä·Î ÇÏ°í, E. coli ligase´Â NAD+¸¦ ÇÊ¿ä·Î ÇÑ´Ù. ÀÌµé µÎ ligase´Â blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNAµî¿¡ ¸ðµÎ ÀÛ¿ëÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸³ª E. coli DNA ligase ´Â T4 DNA ligase¿Í ºñ±³ÇÒ ¶§ blunt-ended DNA¿¡ ÀÛ¿ëÇÏ´Â ÈûÀÌ ¾àÇϹǷΠÀϹÝÀûÀÎ À¯ÀüÀÚ ÀçÁ¶ÇÕ °úÁ¤¿¡¼´Â T4 DNA ligase¸¦ ´õ ¸¹ÀÌ »ç¿ëÇÏ´Â °æÇâÀÌ ÀÖ´Ù.
A. Cohesive end ligation
❑ ½ÇÇè¹æ¹ý
1. ½ÇÇè¿¡ »ç¿ëÇÒ vector¿Í insert¸¦ ÁغñÇÑ´Ù. ¹°·Ð vect¡¦(»ý·«)
|