MTT assay

1.cytotoxicity test (세포 독성 테스트)

독성이 있느냐 없느냐를 테스트 한다. 독성이 있는 물질은 정상 cell과 암 cell에 투여 했을 때 cell이 살아있는 비율 또는 수 보고 효과 있는 물질인지 아닌지를 구별하는 것이다.
독성이 있으니까 당연히 정상 cell과 암 cell이 전부 죽겠지만 독성분의 농도를 낮춰 투여 했을 때 비교적 정상 cell이 많이 살고 암 cell이 많이 죽는 다면 항암 효과가 있다는 뜻

2. MTT assay

(reduce)
MTT(yellow) --------------------> MTT - formazan(purple)
↑
Succinic dehydrogenase
원리
TCA cycle에서 cycle이 돌 때 succinate에서 fumarate로 가는 과정에서 succinic dehydrogenase 가 필요하고 이 cycle에 관여한다.
succinate → Fumarate로 가는 과정에서 MTT를 투여하는 데 여기에서 MTT와 succinate dehydrogenase가 반응해서 formazan을 형성한다.
formazan을 형성하면 cell이 살아 있다는 것이고 보라색을 띤다.
살아있는 cell이면 TCA cycle을 다 돌고 이 cycle이 계속 반복되고 죽어있는 세포는 …(생략)

3. MTT methods

① flask에 있는 cell을 배양하기 위해서 우선 subculture한다.

② medium, PBS, Trypsin - EDTA를 냉장고에서 꺼내어 37℃ water bath에 서 15～20분간 데운다.

③ 실험준비를 한다.

④ incubater에서 flask를 꺼내온다.

⑤ flask 안의 medium을 suction으로 뽑아낸다.

⑥ 75㎠ flask이므로 PBS를 9㎖씩 2번처리한다.