¿øÇü DNAÀÎ plasmid DNA
¼·Ð
`1`plasmid¶õ
¼¼Æ÷ ³»¿¡¼ ÇÙÀ̳ª ¿°»öü¿Í µ¶¸³ÀûÀ¸·Î Á¸ÀçÇÏ¸é¼ ÀÚÀ²ÀûÀ¸·Î ÀÚ°¡Áõ½ÄÇØ ÀÚ¼Õ¿¡ ÀüÇØÁö´Â À¯Àü¿äÀÎÀÌ´Ù. 1952³â¿¡ ¹Ì±¹ÀÇ À¯ÀüÇÐÀÚ J.·¹´õ¹ö±×°¡ ¼¼±Õ·ùÀÇ ¿°»öü ÀÌ¿ÜÀÇ À¯Àü¿äÀÎÀ» Çö󽺹̵å¶ó°í ¸í¸íÇߴµ¥, ÃÖ±Ù¿¡´Â ÁøÇÙ»ý¹°µµ Æ÷ÇÔÇØ ¼¼Æ÷Áú ÀÎÀÚ¿Í °°Àº ¶æÀ¸·Î ÈçÈ÷ ¾²ÀδÙ.
plasmidÀÇ Æ¯Â¡
1)¿øÇüÀÇ ÀÌÁß°¡´Ú DNA(circular double-standed DNA)ÀÌ´Ù
2)¼¼Æ÷³»¿¡¼ ¿°»öü DNA¿Í´Â º°°³·Î Á¸Àç
3)Àڱ⠽º½º·Î º¹Á¦°¡ °¡´É
4)´ëºÎºÐ ¼¼±Õ¿¡ Á¸ÀçÇϳª, ÀϺΠÁøÇÙ¼¼Æ÷¿¡µµ Á¸Àç
5)º¹Á¦±âÁ¡(DNA º¹Á¦ÀÇ ½ÃÀÛÁ¡À¸·Î ¼÷ÁÖ ¹üÀ§ ¹× plasmid DNAÀÇ copy¸¦ °áÁ¤)ÀÌ Á¸ÀçÇÑ´Ù
6)Ç×»ýÁ¦ ÀúÇ×¼º À¯ÀüÀÚ(RÀÎÀÚ)¸¦ °¡Áø´Ù.
7)´ÙÁß Á¦ÇÑÈ¿¼Ò Ŭ·Î´× ºÎÀ§(Multi cloning site, MCS)°¡ Á¸Àç
`2`¡®¿ø½ÉºÐ¸®¡¯¶õ
¿ø½ÉºÐ¸®´Â °íü¿Í °íü¸¦ µÑ·¯½Ñ ¾×ü °£ÀÇ ¹ÐµµÂ÷¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ´Ù. ºÎÀ¯¹°ÀÌ ÀÖ´Â ÇöŹ¾×À» °¡¸¸È÷ µÎ¸é ¹ÐÁýÇÑ °íü´Â Áß·ÂÀÇ ¿µÇâÀ¸·Î ¼¼È÷ °¡¶ó¾É°Ô µÇ´Âµ¥ ÀÌ·¯ÇÑ °úÁ¤ÀÌ Ä§Àü
(sedimentation)ÀÌ´Ù¡¦(»ý·«)
1. 1.5ml E-tube¿¡ pGFPExp ¹è¾ç¾× 1.5mlÀ» ¿Å°Ü ´ã´Â´Ù
2. ¿ø½ÉºÐ¸® ÇÑ´Ù.(14000rpm, 3min)
3. »óÃþ¾×À» ¹ö¸®°í pGFPExp ¹è¾ç¾× 1.5mlÀ» ´Ù½Ã Çѹø ³Ö¾îÁÖ°í ¿ø½ÉºÐ¸® ÇÑ´Ù.
4. 100§¡ Sol¥°À» ÷°¡ÇÑ ÈÄ vertexingÇÏ¿© pelletÀÌ ¿ÏÀüÈ÷ Ç®·È´ÀÁö È®ÀÎÇÑ´Ù.
5. Sol¥±¸¦ Á¦Á¶ ÈÄ, 200§¡¸¦ ÷°¡ÇÑ´Ù.
6. 5ȸ Á¤µµ inverting ½Ç½Ã ÈÄ, ice¿¡ 5ºÐ°£ ³öµÐ´Ù.
7. 150§¡ cold Sol¥²¸¦ ÷°¡ ÈÄ ¿ø½ÉºÐ¸® ÇÑ´Ù.
8. ¿ø½ÉºÐ¸® ÈÄ, »ó¡¾×À» 500§¡¸¦ ÃëÇؼ »õ tude¿¡ ¿Å°Ü´ã´Â´Ù.
9. ÃÑ·®ÀÇ 2¹è·®(1000§¡)ÀÇ Â÷°¡¿î 100%-¿¡Åº¿ÃÀ» °¡ÇÑ ÈÄ, ice¿¡ 5ºÐ°£ º¸°üÇÑ´Ù.
10. ¿ø½ÉºÐ¸® ÇÑ´Ù.(14000rpm, 5min)
11. »ó¡¾×À» ¹ö¸®°í Â÷°¡¿î 70%-¿¡Åº¿Ã 500§¡À» ³Ö´Â´Ù.
12. 1ºÐ°£ ¿ø½ÉºÐ¸®ÇÏ°í 70%-¿¡Åº¿ÃÀ» ¿ÏÀüÈ÷ Á¦°ÅÈÄ ¸»¸°´Ù.
13. DW 50§¡³Ö°í -20¡É¿¡ º¸°üÇÑ´Ù.
`½ÇÇè ¹æ¹ýÀ» ³ªÅ¸³»´Â »çÁø`
`¸ðµç °úÁ¤À» ¸¶Ä¡°í -20¡É ¸ð½À`
óÀ½ Á¢Çغ¸´Â Sol°ú óÀ½À¸·Î Á÷Á¢ »ç¿ëÇغ» ¸¶ÀÌÅ©·Î ÇÇÆê¿¡ Àͼ÷Ä¡ ¾Ê¾Æ¼ ½ÇÇè°úÁ¤ 8¹ø¿¡¼ »ó¡¾× 500§¡¸¦ ÃëÇÒ ¶§, À©½ÉºÐ¸®·Î ¾Æ·¡¿¡ ¸ð¿©ÀÖ´Â ÇÊ¿ä¾ø´Â ºÎºÐÀ» ÇÇÇØ ¼ø¼ö »ó¡¾×¸¸ ÃëÇؾßÇϴµ¥ ÀϺΠÇÊ¿ä¾ø´Â ºÎºÐÀ» °°ÀÌ ÃëÇؼ ¼ø¼ö pla
|