[의학,약학] 일반생물학 실습 - immunohistochemistry와 위 양성반응 경로 차단

일반 생물학 실습
`immunohistochemistry와 위 양성반응 경로 차단`
면역조직화학- 조직이나 세포내의 특정 항원을 항체로 표시 후 관찰하는 기술.
† 실험 목적

1) 항체반응을 이용하여 신경세포를 염색해본다.

2) 실험을 준비하는 과정에서 위 양성반응의 경로를 생각하고 차단하는

설계를 배운다.
† 준비물
Cryotomy 절편을 위해
PBS 조직을 씻거나 조직을 담굴 용액을 희석시킬 때 사용.
Hydrogen peroxide Quenching을 통해 조직 내에 있는 과산화소체에 의한 위 양성반응을 막고, 후에 DAB를 산화시켜 염색하는 역할.
Normal goat serum 세포막에서 나타날 수 있는 위 양성반응 경로 차단
DAB 염색물질. 발암물질이다.
항체 Primary antibody Mouse Anti-GFAP antibody(Ig G)
Secondary antibody Goat Anti-mouse Ig G antibody
† 실험 하기 전에
위 실험은 표적세포에서만 발견되는 단백질에 1차 항체를 붙이고, 그 1차 항체에 2차 항체를 붙인 후, 2차 항체에 붙어있는 peroxidase에 의해 DAB가 H₂O₂와 …(생략)

① Quenching(담그는 과정)

② Block

1. 조직을 30㎛로 cryocut한 후, PBS용액에 5분간 씻는다.

2. 과산화수소를 0.3%로 하여 조직을 15분간 Quenching.

3. PBS에 5분씩, 3번 씻는다.

4. Normal goat serum 5%용액에 1시간동안 담가둔다. (Block)

5. 1차 항체 수용액을 준비한다. 300㎕

6. 1차 항체 수용액에 조직을 담구고 4℃를 유지하여 하루 동안 둔다.