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생물 보고서
- 효소의 활성 측정 -
◆ 제목 : 효소의 활성 측정
◆ 실험 목적
1) 효소의 Km을 이해하고 계산하는 방법을 배운다.
2) pH의 변화에 따른 효소의 반응속도를 비교하고 최적의 pH를 알아낸다.
3) 온도변화에 따른 효소의 반응속도를 비교하고 최적의 온도를 알아낸다.
◆ 서론
효소란?
일반적으로 화학반응에서 반응물질 외에 미량의 촉매는 반응속도를 증가시키는 역할을 한다. 생물체 내에서 일어나는 화학반응도 촉매에 의해 속도가 빨라진다. 특별히 생물체 내에서 이러한 촉매의 역할을 하는 것을 효소라고 부르며 단백질로 이루어져 있다.
단백질로 이루어져 있기 때문에 무기촉매와는 달리 온도나 pH(수소이온농도) 등 환경 요인에 의하여 기능이 크게 영향을 받는다. 즉, 모든 효소는 특정한 온도 범위 내에서 가장 활발하게 작용한다. 대개의 효소는 온도가 35∼45℃에서 활성이 가장 크다. 하지만 온도가 그 범위를 넘어서면, 오히려 활성이 떨어진다. 온도가 올라가면 일반적으로 화학반응 속도가 커지고 효소의 촉매작용도 커지지만, 온도가 일정 범위를 넘으면 효소의 단백질 분자구조가 변형을 일으켜 촉매기능이 떨어지기 때문이다. 또한 효소는 pH가 일정 범위를 넘어도 기능이 급격히 떨어진다. 효소작용은 특정 구조를 유지하고 있을 때에만 나타나는데, 단백질의 구조가 그 주변 용액의 pH의 변화에 따라 달라지기 때문이다.
효소는 아무 반응이나 비선택적으로 촉매하는 것은 아니다. 한 가지 효소는 한 가지 반응만을, 또는 극히 유사한 몇 가지 반응만을 선택적으로 촉매하는 기질특이성을 가지고 있다. 기질이란 효소에 의하여 반응속도가 커지게 되는 물질, 즉 효소에 의하여 촉매작용을 받는 물질을 말한다. 효소에 기질특이성이 있는 것은 효소와 기질이 마치 자물쇠와 열쇠의 관계처럼 공간적 입체구조가 꼭 들어맞는 것끼리 결합하여, …(생략)
1. pH 변화에 따른 효소의 활성도 점검
1) 감자를 강판에 갈아서 거즈로 걸러 카탈라제 효소액을 마련한다.
2) 준비된 효소액 동량 1 ml을 여러 pH 완충용액 1 ml과 섞는다. 조교는 각 조별로 실험할 pH를 지정한다.
3) 실온에서 1 ml의 20% H2O2 solution with 0.25% SDS and 1% glycerol를 준비된 시험관에 넣고 timer로 거품이 시험관을 넘치기 직전까지 시간을 재고 기록한다.
2. 온도 변화에 따른 효소의 활성도 점검
1) 준비된 카탈라제 효소액 1 ml을 실험 1에서 가장 높은 활성도를 나타낸 pH의 완충용액 1 ml 과 섞는다.
2) 조교는 각 조별로 반응시킬 온도를 정해 준다.
3) 1 ml의 20% H2O2 solution with
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